利用Cre/loxP系统构建无标记的htrA基因缺失的变链菌突变株

• 作者: 于丹妮 任志明 张文娟 韩育植
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 链球菌,变异 丝氨酸内肽酶类 整合酶类 重组,遗传 基因缺失 聚合酶链反应 质粒
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 108-111
• 分类号: R3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2011.02.004

摘要

目的:利用Cre/loxP位点特异性重组系统构建口腔变异链球菌htrA基因缺陷株,并删除选择标记.方法:PCR扩增变链菌的htrA基因片段并克隆到pGEM-T-Easy TA载体.随后插入卡那霉素(Km)抗性基因盒(loxP-Km-loxP)并替换htrA基因的部分序列,使htrA基因失活,构建出htrA基因缺失的同源重组载体pIB△htrA-Km.将该质粒电转化变链菌标准株,抗生素筛选出发生同源重组的菌株,再用含cre基因的热敏质粒pCrePA电转化,删除Km抗性基因.在限制性温度下培养,消除质粒pCrePA,获得无标记的变链菌htrA基因缺陷株,经PCR及DNA测序鉴定.结果:PCR及DNA测序分析证明htrA基因的部分序列及Km抗性基因均被删除,该部位只留下一个IoxP位点.结论:成功构建出了变链菌htrA基因缺失突变株,并删除了抗性标记,为进一步研究htrA基因缺失对变链菌致龋毒力的影响奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于丹妮	天津医科大学第二医院口腔科	45	161	7.0	10.0
2	张文娟	天津医科大学第二医院口腔科	53	169	8.0	10.0
3	韩育植	天津医科大学第二医院口腔科	17	59	4.0	6.0
4	任志明	天津医科大学第二医院口腔科	7	30	4.0	5.0