HIV-1 HXB2株Tat核心碱性区多肽Tat38-61的原核表达及其免疫反应性

• 作者: 庞强 张华群 曹洁 潘卫 王锦红 葛宜兵 陈秋莉 黄德胜
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: tat基因产物,人免疫缺陷病毒 核心碱性区 重组融合蛋白质类 原核细胞 基因表达 免疫反应性
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 10-13,24
• 分类号: R373.9|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 构建HIV-1 Tat核心碱性区多肽Tat38-61重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白并进行纯化及免疫反应性检测.方法 采用PCR法从HIV-1 HXB2株Tat1-101基因中扩增编码Tat38-61的基因序列,克隆至原核表达载体pET32a(+)中,构建重组原核表达质粒pET32a(+)-Tat38-61转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经Ni2+-NTA柱亲和层析法纯化后,ELISA法鉴定其免疫反应性.结果 重组原核表达质粒pET32a(+)-Tat38-61经双酶切及测序表明构建正确;SDS-PAGE分析显示,在相对分子质量约21 300处可见目的 蛋白条带,表达量占菌体总蛋白的67.4%,主要以可溶形式表达;纯化后融合蛋白的纯度可达97%以上;ELISA结果显示,该融合蛋白与兔抗PEPTIDE-Tat1-101血清及HIV阳性血清均呈特异性反应.结论 已成功构建了HIV-1 Tat核心碱性区多肽Tat38-61的重组原核表达质粒,表达并纯化了PEl32a(+)-Tat38-61融合蛋白,该融合蛋白碱性区表位得到较好的保留,为Tat38-61噬菌体突变文库的构建及亲和筛选奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘卫	第二军医大学微生物教研室	64	255	8.0	12.0
2	曹洁	第二军医大学微生物教研室	110	904	16.0	23.0
3	陈秋莉	第二军医大学微生物教研室	16	102	6.0	9.0
4	王锦红	第二军医大学微生物教研室	7	7	2.0	2.0
5	庞强	第二军医大学微生物教研室	5	4	1.0	2.0
6	黄德胜	安徽医科大学病理生理学教研室	2	3	1.0	1.0
7	张华群	第二军医大学微生物教研室	3	3	1.0	1.0
8	葛宜兵	安徽医科大学病理生理学教研室	1	0	0.0	0.0