神经干细胞原代培养方法的优化

• 作者: 兰艳纤 李金恒 王克万 王勇
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 神经干细胞 海马 胰酶 细胞增殖 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 456-460
• 分类号: Q25
• 字数: 4218字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2011.05.007

摘要

目的 探讨低浓度胰酶不同消化分离时间对体外培养新生大鼠海马NSCs增殖与凋亡的影响.方法 取出生24 h内SD大鼠海马组织,以1.25 g/L胰酶37℃分别消化5、10、15、20和25min(依次为A～E组),获得单细胞悬液后进行培养.通过台盼蓝染色计数、细胞形态观察和神经球数目比较不同消化时间对NSCs活力和生长的影响;用5-溴-2脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法检测NSCs的增殖能力;用免疫荧光细胞化学法检测BrdU、nestin的表达:用Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 原代和传代培养的NSCs都能快速增殖并形成神经球;免疫荧光染色结果显示神经球细胞均表达NSCs特异性标志物nestin;所获得的细胞能将BrdU结合到细胞核中;各组培养3、5、7 d后,C组(消化15 min)NSCs成球数最多,BrdU标记克隆率最高,细胞凋亡率最低,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 体外分离培养的新生大鼠海马NSCs具有增殖能力,1.25 g/L胰酶在不同消化时间对NSCs增殖能力和凋亡率的影响有所不同,消化时间过长或过短都会抑制NSCs增殖,诱导NSCs凋亡,且消化时间越长NSCs的凋亡率越高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王勇	南方医科大学珠江医院药剂科	48	263	8.0	13.0
2	王克万	南方医科大学南方医院神经外科	31	101	4.0	8.0
3	兰艳纤	南方医科大学南京军区南京总医院药理科	1	6	1.0	1.0
4	李金恒	南方医科大学南京军区南京总医院药理科	1	6	1.0	1.0