重组丙型肝炎病毒腺病毒载体疫苗rAd/E2的构建及鉴定

• 作者: 于花 刘云宁 尹玉蕾 张永红 李小凤 蓝佳明 谢立新 金玉怀
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 丙型肝炎病毒 E2基因 腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 187-191
• 分类号: R373.21|Q782
• 语种: 中文

摘要

目的 构建含丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)E2基因的复制缺陷型重组腺病毒载体疫苗,并进行鉴定.方法 以含HCV(1a亚型)E2基因的质粒pEGFP-HCV/E1E2为模板,PCR扩增E2基因,扩增产物与pGEM-T载体连接,测序正确后双酶切亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/E2,Pme Ⅰ酶切线性化后,与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌内同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd/E2,PacⅠ酶切线性化后,脂质体LipofectamineTM 2000介导转染HEK293细胞进行包装,获得重组腺病毒rAd/E2,在HEK293细胞内扩增,利用报告基因GFP的表达监测病毒包装及感染效率,PCR、RT-PCR和Westem blot对重组腺病毒进行鉴定,并测定各代病毒的滴度.结果 测序结果证明HCV E2基因序列正确;重组腺病毒质粒pAd/E2经酶切证明重组成功;PCR、RT-PCR及Western blot结果均证实重组腺病毒rAd/E2构建正确;第4代重组腺病毒的滴度为7.5×108 pfh/ml.结论已成功构建了重组HCV腺病毒rAd/E2,为丙型肝炎疫苗的研制提供了新的途径.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蓝佳明	河北医科大学病原生物学教研室	13	45	4.0	6.0
2	张永红	河北医科大学病原生物学教研室	29	164	8.0	12.0
3	谢立新	河北医科大学病原生物学教研室	19	120	5.0	10.0
4	李小凤	河北医科大学病原生物学教研室	1	0	0.0	0.0
5	于花	河北医科大学病原生物学教研室	1	0	0.0	0.0
6	刘云宁	河北医科大学病原生物学教研室	1	0	0.0	0.0
7	尹玉蕾	河北医科大学病原生物学教研室	1	0	0.0	0.0