原代培养差速贴壁法分离纯化大鼠腰椎间盘髓核细胞

• 作者: 孙浩林 李淳德
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 髓核细胞 原代培养 差速贴壁法 椎间盘 大鼠
• 年，卷（期）: 2011,（46）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 8569-8573
• 分类号: R318
• 字数: 5035字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.46.005

摘要

背景:髓核细胞在体外培养过程中存在表型丢失问题,包括Ⅱ型胶原、aggrecan、Sox-9 等表达的下降,由类软骨细胞向类纤维样细胞转化.目的:体外原代培养差速贴壁法分离纯化大鼠腰椎间盘髓核细胞.方法:经胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶先后消化Wistar 大鼠椎间盘髓核组织,第1,2 代细胞传代时采用差速贴壁法分离纯化髓核细胞.结果与结论:分离纯化后的第3 代髓核细胞呈圆形或多角形,活力强,苏木精-伊红染色细胞核染成均一蓝黑色,胞浆呈现淡粉色;Ⅱ型胶原免疫组织化学染色阳性细胞比例为97%;aggrecan 免疫组织化学染色阳性细胞比例为95%;扫描电镜可见细胞内有高尔基体、粗面内质网和游离核糖体,未见线粒体,可见少量板层小体;CCK-8 生长曲线显示细胞经过2d 的生长潜伏期,3d 的指数生长期,进入生长停滞期.说明原代培养、两次差速贴壁法分离纯化的大鼠髓核细胞代谢旺盛、表型一致.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙浩林	北京大学第一医院骨科	62	434	13.0	17.0
2	李淳德	北京大学第一医院骨科	118	1052	16.0	26.0