重组人髓鞘少突胶质细胞糖蛋白的表达、纯化及免疫原性

• 作者: 夏君慧 张旭 李佳 翁益云
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 髓鞘少突神经胶质细胞糖蛋白 脑脊髓炎,实验性自身免疫性 多发性硬化
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 1245-1248
• 分类号: R341.32
• 字数: 3981字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2011.06.038

摘要

目的:建立人少突胶质细胞糖蛋白细胞外Ig样结构域(MOGIgd)的硫氧还蛋白(TrxA)融合表达系统,探讨表达产物MOGIgd- TrxA融合蛋白的免疫原性.方法:(1)应用RT-PCR方法,以人脑组织的总RNA为模板扩增出编码MOGIgd的cDNA序列,将MOGIgd cDNA克隆到TrxA融合表达载体pET32a(+)中,重组质粒pET32a-MOGIgd经表型筛选、酶切鉴定及测序鉴定后,转化至BL21(DEB)trxB-宿主菌中经异丙硫代钠-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并通过金属鳌合亲和层析柱进行纯化.(2)C57BL/6小鼠分为MOGIgd- TrxA组(MOG组)、硫氧还蛋白组(TrxA组)及正常对照组(NC组),12只/组,各组以相应抗原乳剂免疫小鼠制作实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型后观察其临床神经功能和组织病理学改变(HE染色和髓鞘Luxol fast blue染色)评价模型质量.结果:(1)成功获取高产量32 kD MOGIgd- TrxA融合蛋白,以包涵体形式表达,纯化后纯度达95%左右.(2)MOG组小鼠75%(9/12)发病,于免疫后第(12.14±2.04)d发病,呈慢性非缓解型病程;发病动物组织切片HE染色和髓鞘染色显示不同程度炎性细胞浸润和髓鞘脱失.结论:成功建立人MOGIgd的TrxA融合表达系统,表达产物MOGIgd-TrxA融合蛋白可作为免疫原诱导EAE动物模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张旭	温州医学院附属第一医院神经内科	110	548	11.0	18.0
2	李佳	温州医学院附属第一医院神经内科	20	133	6.0	10.0
3	夏君慧	温州医学院附属第一医院神经内科	49	170	7.0	9.0
4	翁益云	温州医学院附属第一医院神经内科	11	40	4.0	6.0