hBcl-2和hVEGF165双基因重组腺病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究

• 作者: 何晓青 侯宁 倪晓彬 刘世明 林育辉 罗承锋 董颀 赵路宁 陈敏生
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: hBcl-2基因 hVEGF165基因 骨髓间充质干细胞 腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 页码范围: 548-551
• 分类号: R3
• 字数: 4718字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2011.05.002

摘要

目的 将hBcl-2和hVEGF165双基因共表达重组腺病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),检测目的 基因的表达及表达产物的生物学效应.方法 贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞;重组腺病毒转染BMSCs,用PCR法验证目的 基因mRNA在间充质干细胞中的表达;用ELISA及Western Blot检测双基因在转染后细胞的蛋白表达量;用MTT法及Annexin V-PE/7-AAD法分别观察对转染后BMSCs增殖及凋亡的影响.结果 大鼠BMSCs分离纯化成功.在mRNA水平,转染后的BMSCs可表达这两个外源基因;转染后细胞培养上清液hVEGF165峰浓度达到(924.3±56.5) pg/mL,多个时间点与对照组相比,浓度差异有统计学意义(P＜0.05);Western Blot也检测到转染后细胞Bcl-2蛋白表达量明显比对照组增加(P＜0.05).MTT比色法观察到,转染细胞分泌的hVEGF165上清液可促进BMSCs的增殖(P＜0.05);用Annexin V-PE/7-AAD检测转染后间充质干细胞的凋亡率下降,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 转染重组腺病毒载体的BMSCs能够表达hBcl-2及hVEGF165,并且表达产物具有生物学效应.