融合蛋白anti-HER2-ScFv-GFP在昆虫细胞中的表达及其靶向结合乳腺癌细胞的功能分析

• 作者: 包兵兵 张羽 杨水兵 杨纪峰 王金丹 胡孝渠 高国辉 黄奇迪
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 抗HER2单链抗体可变区片段 绿色荧光蛋白 融合基因表达
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 1034-1040
• 分类号: R363
• 字数: 5863字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2011.05.040

摘要

目的:利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达获得携带绿色荧光蛋白(GFP)的抗人表皮生长因子受体2(HER2)的单链抗体可变区片段(ScFv),分析其靶向结合乳腺癌细胞表面受体HER2的功能.方法:构建融合基因anti-HER2-ScFv-GFP,重组获得真核表达载体重组子pFAST Bac-to-Bac HT A/anti-HER2-ScFv-GFP,转化DH10Bac,收集重组病毒bacmid,分别转染、感染粉纹夜蛾细胞Tn-5B1-4,SDS-PAGE及Western blotting分析融合蛋白表达产物.Ni2+-NTA 亲和层析法纯化anti-HER2-ScFv-GFP融合蛋白后分别滴入乳腺癌细胞HER2阳性的SKBR3和HER2阴性的MCF7,对比携带绿色荧光的抗HER2单链抗体靶向结合乳腺癌细胞表面HER2受体情况.结果:获得长度约1 539 bp的融合基因anti-HER2-ScFv-GFP,感染重组病毒的Tn-5B1-4细胞膜附近有明显绿色荧光,SDS-PAGE、Western blotting法检测到60 kD的特异性条带.结合实验显示HER2阳性的SKBR3细胞表面有明显绿色荧光,而HER2阴性的MCF7细胞表面荧光易被洗脱.结论:在Tn-5B1-4中成功表达携带绿色荧光的融合蛋白anti-HER2-ScFv-GFP,该携带绿色荧光的抗HER2单链抗体具有靶向结合乳腺癌细胞表面HER2受体的效能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄奇迪	温州医学院附属第一医院肿瘤外科	9	44	3.0	6.0
2	王金丹	温州医学院生命科学院	5	10	3.0	3.0
3	杨纪峰	温州医学院生命科学院	8	18	2.0	4.0
4	高国辉	温州医学院生命科学院	7	37	3.0	6.0
5	杨水兵	温州医学院生命科学院	2	6	2.0	2.0
6	包兵兵	温州医学院仁济学院	1	3	1.0	1.0
7	张羽	温州医学院仁济学院	1	3	1.0	1.0