基于易错PCR技术的黏质沙雷氏菌脂肪酶基因LipA的定向进化

• 作者: 张搏 朱绮霞 陈东 陈英 黄日波
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 黏质沙雷氏菌 脂肪酶 易错PCR 定向进化
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 181-185
• 分类号: Q78
• 字数: 2871字
• 语种: 中文

摘要

利用易错PCR技术对黏质沙雷氏菌脂肪酶基因LipA进行定向进化,经过筛选最终获得一个比活力比野生酶提高了425 U/mg的突变体ep1,测序分析ep1有5个氨基酸发生了突变,与野生酶相比ep1的最适pH值由原来的8.5降低为7.5,Tm值提高3℃,Km值由原来的40 mg/mL降低为12.5 mg/mL.对其三维结构进行分析,推测酶学性质的改变可能与处在活性中心右前方双螺旋发卡结构上的158A、和处在下部β卷曲折叠拐角处的S375G的突变有关.