eEF1A1基因克隆、原核分泌表达及融合蛋白纯化

• 作者: 崔晓君 常晓月 朱乃硕 郭艳荣 魏勋斌
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: eEF1A1 基因克隆 分泌表达 融合蛋白 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 127-133
• 分类号: Q78
• 字数: 4764字
• 语种: 中文

摘要

eEF1A1作为蛋白合成中的重要翻译延伸因子,可与多种功能性蛋白如F-actin、BPOZ-2结合,并在细胞凋亡、蛋白降解方面起重要作用.以往原核基因工程蛋白表达系统大多为包涵体表达的变性分子,需要复性.为了获得eEF1A1原核分泌性可溶性蛋白分子,克隆了人eEF1A1蛋白编码序列(约1 300 bp),并成功构建pET22b-A原核分泌表达重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,0.4 mmol/L终浓度IPTG诱导,经不同温度下包涵体与胞浆蛋白组分分析,快速明确蛋白表达情况,即诱导4 h后,37℃表达于包涵体组分,在30℃分泌表达至胞浆组分.通过His-Trap亲和层析纯化柱进行线性洗脱,Bradford法测定蛋白浓度高达620 mg/mL,SDS-PAGE分析纯度约为95%,蛋白大小符合50 kD,Western blotting显示目的蛋白能被eEF1A1抗体识别;质谱分析证实重组蛋白为人eEF1A1蛋白分子.为进一步研究其与重要功能性蛋白的相互作用及在细胞凋亡和蛋白降解中的作用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱乃硕	复旦大学生物医学研究院	48	182	8.0	11.0
5	魏勋斌	复旦大学生物医学研究院	6	22	3.0	4.0
6	常晓月	复旦大学生命科学学院	2	2	1.0	1.0
7	郭艳荣	复旦大学生物医学研究院	1	2	1.0	1.0
11	崔晓君	复旦大学生物医学研究院	1	2	1.0	1.0