外源性EGR1瞬时表达对骨肉瘤细胞细胞周期和凋亡的影响

• 作者: 张惠华 梁旭竞 段飞蝶 秦丽 郭淑军 陈友鹏 陈小佳
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因 早期生长反应 瞬时表达 骨肉瘤细胞 生长抑制
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 293-299
• 分类号: R363
• 字数: 4840字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2011.02-016

摘要

目的:获得人早期生长反应1(EGR1)基因,并在人骨肉瘤细胞中瞬时表达,研究该基因在人骨肉瘤细胞中的作用,并探讨其可能的作用机制.方法:以人胎盘组织为模板,巢式PCR(nest PCR)扩增获得EGR1全长基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),酶切、PCR鉴定并测序正确后,命名为pcDNA-EGR1.脂质体法将重组载体转染人骨肉瘤细胞U2OS,实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫印迹检测目的基因的表达; MTT法检测细胞生长和增殖情况;流式细胞仪和DAPI染色检测细胞的周期变化和凋亡情况;qPCR检测细胞中与细胞周期、凋亡相关基因的表达变化情况;短发夹RNA(shRNA)干扰EGR1后,检测细胞的变化情况.结果:成功获得了人EGR1基因并构建了其重组表达载体pcDNA-EGR1.EGR1可有效地在U2OS中瞬时表达;可显著抑制细胞增殖(P＜0.05),并呈一定的剂量依赖.EGR1可引起细胞周期停滞于G0/G1期,并促进凋亡率增加(P＜0.05).EGR1可引起细胞核出现明显的固缩和凋亡表型.EGR1可引起周期相关基因表达下调,凋亡相关基因表达则显著上调.shRNA干扰EGR1后,细胞凋亡表型和EGR1所调控的相关基因表达水平与对照组一致.结论:EGR1具有抑制骨肉瘤细胞增殖作用,能调节骨肉瘤细胞周期和凋亡相关基因的表达,从而促进细胞周期停滞和凋亡率的增加.