大鼠D-双功能蛋白基因原核表达载体的构建及表达

• 作者: 刘昆 史海水 姚敏 姜玲玲 许丽辉 贺文 赵雪彦
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 医学
• 关键词: D-双功能蛋白 原核表达 包涵体 大鼠
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 139-142,152
• 分类号: R3
• 字数: 2852字
• 语种: 中文

摘要

利用原核表达系统构建大鼠D-双功能蛋白表达栽体.设计基因拼接引物,通过RT-PCR合成DBP基因cDNA序列,将酶切、纯化的DBP基因与经相同处理的表达栽体pET-28a相连接,转化感受态大肠杆菌DH5α,筛选阳性重组子.将通过酶切及序列分析鉴定阳性的重组子质粒转入感受态大肠杆菌BL21-gold表达菌中,经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE分析目的蛋白表达情况.结果显示,成功获得了包含DBP基因的双链cDNA序列,酶切、序列分析及Western blotting证实成功构建了DBP基因的原核表达载体.通过原核表达系统,DBP蛋白以包涵体形式产生,复性后可获得高表达的目的蛋白.