应用改良差速贴壁法和有限稀释技术分离培养小鼠来源肌源干细胞

• 作者: 丁维进 刘安堂 唐乙 宋艳玲 李翠 江华 胡霞 苏志达
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 肌源干细胞 差速贴壁法 有限稀释技术 克隆 亚克隆
• 年，卷（期）: 2011,（36）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 6797-6801
• 分类号: R394.2
• 字数: 5568字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.36.034

摘要

背景:研究者们通过多种方法从肌组织中分离得到肌源干细胞,并应用于各类组织工程和再生医学研究.目的:结合改良的差速贴壁法和有限稀释技术分离小鼠来源肌源干细胞,并培养其单细胞克隆和亚克隆集落.方法:以新生C57BL/6小鼠四肢作为肌组织取材对象,经三重酶消化和细胞筛过滤,运用改良的差速贴壁法分离出肌源干细胞,予细胞特异标记物以免疫组织化学染色;以有限稀释技术克隆培养的方法,获得稳定的肌源干细胞单克隆和亚克隆集落.结果与结论:差速贴壁培养过程中,肌性细胞占比逐渐增高,首次贴壁1 h可以获得足够数量的细胞进行第6次贴壁培养;肌源干细胞需72 h左右贴壁生长,经10 d左右可以增殖为300~500细胞数量的集落,细胞形态以小圆形细胞为主,并有少量梭形细胞,肌源干细胞能够维持形态并持续增殖;应用有限稀释技术可获得肌源干细胞单克隆和亚克隆集落,肌源干细胞克隆细胞均呈现Desmin染色阳性,Sca-1染色阳性,阳性率为(92.3±4.1)%.提示应用preplate法和有限稀释技术可以分离得到小鼠来源肌源干细胞及其克隆集落.