慢性乙肝患者石蜡包埋肝组织中HBV cccDNA定量检测方法的建立

• 作者: 任晓强 刘学恩 刘树红 徐东平 赵景民 邹正升 钟彦伟 韩佳琪
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,乙型 DNA,环状 核酸扩增技术
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 459-462
• 分类号: R512.62
• 语种: 中文

摘要

目的 建立慢性乙肝患者微量石蜡包埋肝组织共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)定量检测方法.方法 以37例慢性乙肝患者甲醛同定石蜡包埋肝组织为研究对象,提取肝组织HBV DNA,经不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)消化后,利用滚环扩增加跨缺口实时荧光PCR扩增技术检测肝组织中HBV cccDNA含量,以β-actin为内参照.通过已知浓度的模板DNA进行梯度稀释鉴定该方法的灵敏度,并对该方法进行批内和批间重复性检测.应用该方法分析37例慢性乙肝患者肝组织HBV cccDNA与血清总HBVDNA、肝组织总HBVDNA的关系,以及肝组织HBV cccDNA和HBVDNA与血清HBeAg表达之间的关系.结果 成功建立了微量石蜡包埋肝组织HBV cccDNA的定量检测方法,该方法具有较好的特异性、灵敏度和稳定性.HBeAg阳性者肝组织中cccDNA含量明显高于HBeAg阴性者,HBV cccDNA水平与血清总HBV DNA水平(R2=0.48,P=0.042)及肝组织总HBV DNA水平(R2=0.63,P=0.001)呈正相关.结论 该方法可特异灵敏地定量检测微量石蜡包埋组织切片中的HBV cccDNA.