松材线虫杂交探针制备与检测技术

• 作者: 叶建仁 吴小芹 郝德君 陈凤毛
• 来源期刊: 东北林业大学学报
• 关键词: 松材线虫 非放射性探针 核酸斑点杂交 地高辛探针
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 126-128
• 分类号: S763.18
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-5382.2011.05.041

摘要

选用松材线虫特异引物对M03F2/R1(Fl:5'-CGGGT CATGG CTGGA GGTAT CGT-3',R1:5'-TCGCT CAATG GCAAA TTCTT CGTA-3'),以Dig-11-dUTP代替部分dTTP,采用PCR技术,直接扩增松材线虫特异片段作为松材线虫地高辛探针.结果表明,地高辛探针长度一致,为600bp.产量较高,探针质量浓度达280 mg/L.采用探针DIG-F2/R1对线虫基因组DNA进行点杂交,19个松材线虫株系均表现有较强的杂交信号,而8个拟松材线虫、1个霍夫曼尼伞滑刃线虫、1个大核滑刃线虫、1个长尾属线虫均无杂交信号.且用该探针可以稳定地检测出单条松材线虫.因此,该探针特异性强,灵敏度高.该探针及其配套的杂交检测技术可以用于检测线虫样本中是否含有松材线虫.