副猪嗜血杆菌实时荧光PCR快速检测方法的建立和应用

• 作者: 彭昊 李军 杨威 潘艳 禤雄标 胡帅 许力干 谢宇舟 谢永平 陈泽祥 马春霞
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 副猪嗜血杆菌 实时荧光PCR 16 S rRNA
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 动物与饲料科学
• 页码范围: 3607-3609,3629
• 分类号: S856.3
• 字数: 3980字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2011.06.166

摘要

[目的]建立一种快速准确定量检测副猪嗜血杆菌(HPS)的检测方法.[方法]根据GenBank公布的副猪嗜血杆菌16 S rRNA基因序列,选择其保守区域设计1对特异性引物.通过优化引物浓度和退火温度,建立快速定量检测副猪嗜血杆菌的实时荧光PCR方法.并评价了其特异性和稳定性.[结果]建立的实时荧光PCR方法最低检测限是50拷贝/μl,重复性好,变异系数均小于2%.该方法特异性强,只能检测副猪嗜血杆菌,不能检测到猪链球菌2型、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌DH<,5α>和猪伤寒沙门氏菌.采用该方法对10份临床疑似HPS感染样本进行检测,其结果与细菌分离培养和常规PCR的结果一致.[结论]建立的实时荧光PCR方法快速、灵敏、特异、重复性高,可用于HPS感染的临床快速检测.