反转录病毒介导基质金属蛋白酶特异性组织抑制剂1基因转染骨髓间充质干细胞的成骨能力

• 作者: 朱双林 柳发铿 胡开顺 高文玲
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 下颌骨 骨髓 间充质干细胞 成骨能力 基质金属蛋白酶特异性组织抑制剂
• 年，卷（期）: 2011,（19）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 3463-3466
• 分类号: R394.2
• 字数: 4770字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.19.010

摘要

背景:间充质干细胞成骨分化早期是成骨性细胞外基质细胞外间质的堆积,其主要成分均是基质金属蛋白酶特异性组织抑制剂1(tissue Inhibitor of Metalloproteinases 1,TIMP-1)作用的基质金属蛋白酶作用底物,通过增加TIMP-1的表达,是否可以抑制基质金属蛋白酶的活性,进而影响间充质干细胞的成骨分化能力?目的:观察反转录病毒介导TIMP-1基因转染骨髓间充质干细胞的成骨能力.方法:设计In-Fusion引物扩增TIMP-1基因片段,与酶切后线性化的pBABE-Puro反转录病毒表达载体进行位点同源重组,构建TIMP-1基因反转录病毒表达载体,RT-PCR和测序验证,并使用GP-293细胞进行包装.通过密度梯度法分离人下颌骨来源骨髓间充质干细胞,流式细胞仪验证其表面标记.将TIMP-1反转录病毒包装液感染骨髓间充质干细胞并筛选稳定表达TIMP-1细胞株,RT-PCR和蛋白电泳验证其表达,并使用成骨诱导液诱导10 d,观察其对成骨能力的影响,RT-PCR验证其成骨相关基因的表达.结果与结论:经测序证实,RT-PCR所获得的TIMP-1基因 cDNA 序列与NM_003254.2(624 bp)序列完全一致;通过表面标记鉴定证实成功分离了人骨髓间充质干细胞,并具良好的成骨、成脂能力;RT-PCR和Western Blot验证反转录病毒载体成功介导TIMP-1转染骨髓间充质干细胞,RT-PCR表明成骨诱导10 d时,TIMP-1基因感染组成骨增加,RUNX-2和COL1 mRNA表达增加.提示TIMP-1基因可通过反转录病毒成功转染人骨髓间充质干细胞,并能促进其成骨.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱双林		26	127	7.0	9.0
2	柳发铿		3	11	1.0	3.0
3	胡开顺		5	9	2.0	3.0
4	高文玲		2	1	1.0	1.0