靶向PERK基因的shRNA真核表达载体的构建及对内质网应激状态下L02肝细胞凋亡的影响

• 作者: 姚隆 曹洁 杨朝霞 沈薇
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因,PERK RNA干扰 shRNA 表达载体 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2376-2381
• 分类号: R575.5
• 字数: 5178字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2011.12.026

摘要

目的:构建靶向RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(PERK)基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,观察其对内质网应激(ERS)状态下人正常肝细胞株L02凋亡的影响.方法:根据PERK基因核苷酸序列,按照小干扰RNA(siRNA)靶序列的设计原则,设计并构建靶向PERK基因mRNA的3个特异性shRNA表达载体(PERK1-shRNA、PERK2-shRNA、PERK3-shRNA)和1个无同源性的阴性对照载体(HK-shRNA),经酶切和测序鉴定确认shRNA载体构建成功后,转染L02肝细胞,RT-PCR和Western blotting方法检测PERK基因的表达,筛选出抑制效果最佳的表达载体.分别应用MTT法和流式细胞术检测ERS状态下沉默了PERK基因的L02肝细胞活力和凋亡的变化.结果:经酶切和测序鉴定证实,4个shRNA表达载体均构建成功.RT-PCR和Western blotting结果显示,与空白对照组相比,PERK1-shRNA、PERK2-shRNA、PERK3-shRNA组L02细胞中PERK基因在mRNA及蛋白水平上的表达均明显降低(P<0.05),其中PERK1-shRNA干扰效果最强.MTT法和流式细胞术结果表明,沉默PERK基因能明显增加ERS状态下肝细胞活力、抑制其凋亡(P<0.05).结论:成功构建靶向PERK基因的shRNA真核表达载体,PERK基因缺失对ERS状态下L02肝细胞凋亡有抑制作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹洁	重庆医科大学附属第二医院消化科	20	52	4.0	5.0
2	杨朝霞	重庆医科大学附属第二医院消化科	16	92	6.0	9.0
3	沈薇	重庆医科大学附属第二医院消化科	116	977	16.0	25.0
4	姚隆	江津区中心医院重症医学科	2	13	2.0	2.0