EDS1多肽抗体的制备和应用

• 作者: 于丹丹 刘家驹 刘开兴 宋宝安 李向阳 杨松 毕亮 王贞超 胡德禹 陈卓
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: EDS1 序列分析 多肽合成 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2011,（30）
• 所属期刊栏目: 生物技术-研究报告
• 页码范围: 164-170
• 分类号: S1
• 字数: 5226字
• 语种: 中文

摘要

EDS1蛋白是植物寄主SA信号转导通路中具有重要调控功能的蛋白,为获得效价高和选择性强的EDS1抗体,根据NCBI GenBank中报道的EDS1蛋白一级结构信息,采用Blastn、Blastx和ExPASy等生物信息学软件进行序列同源性分析,获得三段序列特异性较高的多肽,并从中优选一段序列特异性多肽,采用9-氟甲氧羰基固相合成法获得序列特异性最好的多肽,采用HPLC和GC-MS测定合成多肽的浓度和分子量,试验表明目的多肽纯度达89.37％,目的多肽分子量为1978.33.采用碳化二亚胺法将多肽与KLH进行偶联获得免疫原-Pep-KLH,并将其免疫新西兰大白兔以获得抗血清和多克隆抗体,采用间接-ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,经间接-ELISA检测表明抗血清和多克隆抗体可与Pep发生特异性免疫反应,经Western blotting试验表明抗血清和多克隆抗体可识别烟草叶片特异性条带,其相对分子量为70 kD,与预测分子量相符,表明利用该方法制备的EDS1多肽抗体具有较高特异性和灵敏度.