DNA Ladder的制备

• 作者: 张俊河 王俐 王天云 董卫华
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: DNA分子量标准参照物 PCR 凝胶电泳 pUC-DNA PCR回收产物
• 年，卷（期）: 2011,（24）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 4493-4496
• 分类号: R318
• 字数: 4584字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.24.030

摘要

背景:目前,制备DNA 分子量标准的方法主要有2 种,一种是用限制性内切酶消化某种DNA,另一种是利用PCR 扩增,2 种方法各有优缺点.在前期采用PCR 技术在前期扩增100～500 bp 片段的基础上,实验室又成功扩增出600～1 000 bp片段,PCR 产物经过纯化,混匀,制备的DNA Ladder,结果制备DNA Ladder 的条带清晰,易于识别,可完全与公司商品化的DNA Ladder 相比,完全可用于分子生物学实验.目的:利用PCR 扩增技术制备DNA 分子量标准参照物.方法:自行构建了一种特殊适宜扩增的质粒pUC-DNA,根据pUC-DNA 的基因序列,利用primer5.0 设计能特异扩增100～1 000 bp 的PCR 引物.PCR 扩增出100～1 000 bp 大小的DNA 片段,在2%琼脂糖凝胶中电泳观察结果.用凝胶回收试剂盒回收目的PCR 产物,测序结果与pUC-DNA 上基因序列进行序列比对,Blast 进行同源性分析.将PCR 产物用酚/氯仿抽提,乙醇沉淀,按比例混匀,即可使用.结果与结论:利用PCR 技术能够成功扩增出100～1 000 bp 条带,片段大小与预期结果相符,片段序列与GenBank 序列完全一致,利用回收片段制备的DNA Ladder 条带清晰,可与同类产品相比.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董卫华	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	35	241	9.0	14.0
2	王天云	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	76	498	10.0	20.0
3	张俊河	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	31	147	6.0	11.0
4	王俐	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	22	118	7.0	9.0