富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1基因特异性RNA干扰表达载体的构建、鉴定和稳定株筛选

• 作者: 刘红朝 王宝峰 蔡明俊 谢蕊繁 郭东生 雷霆
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1 RNA干扰 胶质母细胞瘤 转染 组织工程
• 年，卷（期）: 2011,（24）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 4553-4556
• 分类号: R318
• 字数: 1174字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.24.045

摘要

背景:有研究表明富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 1,LRIG1)基因在神经胶质瘤细胞中呈低表达,LRIG1基因过表达后对神经胶质瘤细胞的 LRIG1 mRNA和蛋白表达均明显增强和抑制其生物学行为,但却很少有研究从阻断LRIG1基因的表达的角度进行论证.目的:构建针对LRIG1基因的特异性RNA干扰质粒,稳定转染人脑胶质瘤GL15细胞系,观察其对目的基因LRIG1表达的影响.方法:根据GenBank提供的LRIG1基因序列设计2条RNA干扰序列,命名为LRIG1-shRNA1和LRIG1-shRNA2,并设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为pGenesil2-negative shRNA.合成各自的寡核苷酸链,退火后与pGenesil2质粒载体连接,转化扩增后测定序列.用不同浓度的G418作用于GL15细胞确定G418对GL15细胞的筛选浓度.将3种重组表达载体转染GL15细胞,G418筛选后挑单克隆并扩增获得稳定株.Western blot检测LRIG1蛋白的表达.结果与结论:构建的重组pGenesil2-LRIG1- shRNA质粒经限制性酶切及DNA测序分析证明其序列插入正确.转染pGenesil2- LRIG1-shRNA1(LRIG11)细胞和pGenesil2- LRIG1-shRNA2(LRIG12)细胞LRIG1蛋白表达水平较阴性对照组pGenesil2-negative shRNA分别下降47.9%(P < 0.01)和32.8% (P > 0.05).结果证实,实验成功构建了针对LRIG1基因的特异性shRNA表达载体pGenesil2-LRIG1-shRNA1,其转染GL15细胞后可抑制LRIG1的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	雷霆	华中科技大学同济医学院附属同济医院神经外科	387	1665	16.0	21.0
2	刘红朝	华中科技大学同济医学院附属梨园医院神经外科	12	123	6.0	11.0
3	郭东生	华中科技大学同济医学院附属同济医院神经外科	75	286	9.0	12.0
4	蔡明俊	华中科技大学同济医学院附属同济医院神经外科	8	60	4.0	7.0
5	王宝峰	华中科技大学同济医学院附属同济医院神经外科	25	58	5.0	6.0
6	谢蕊繁	华中科技大学同济医学院附属同济医院神经外科	19	103	5.0	10.0