基于DNA染料EMA的RT-PCR技术定量检测海产品中病原性副溶血弧菌活细胞

• 作者: 刘月萍 吕淑霞 张良 祝儒刚
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 叠氮溴化乙锭(EMA) 实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR) 海产品 副溶血弧菌 活细胞
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 分析检测
• 页码范围: 219-225
• 分类号: TS201.6
• 字数: 5910字
• 语种: 中文

摘要

将一种DNA染料叠氮溴化乙锭(ethidium bromide monoazide,EMA)与实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)技术相结合,建立一种能选择性定量检测牡蛎中trh阳性副溶血弧菌活细胞的新方法.结果表明:使EMA成功插入死细胞DNA并且光解溶液中游离EMA的最佳曝光时间为20min;不抑制副溶血弧菌活细胞DNA扩增的最大EMA质量浓度为2.Oμg/mL;完全抑制热致死细胞DNA扩增的最小EMA质量浓度为1.0μg/mL;人工污染牡蛎样品,不经过富集,在2.0×10(3)-2.0×10(7)CFU范围内细胞数的常用对数值与Ct值之间呈严格的负相关性,并且纯培养与人工污染牡蛎样品的RT-PCR检测限均为2×10(3)CFU,即人工污染牡蛎样品的RT-PCR检测灵敏度为每克牡蛎样品400个活细胞;冻融实验表明,在温度低于55℃的水浴中对冷冻海产品进行解冻时,冻融过程对副溶血弧菌活细胞几乎没有影响.该方法是一种快速、灵敏且能有效鉴别并定量检测病原活细胞的新方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张良	沈阳农业大学生物科学技术学院	33	314	9.0	17.0
2	吕淑霞	沈阳农业大学食品学院	97	810	15.0	23.0
6	祝儒刚	沈阳农业大学食品学院	15	55	4.0	7.0
10	刘月萍	沈阳农业大学生物科学技术学院	3	23	2.0	3.0