含绿色荧光蛋白基因重组质粒的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

• 作者: 何军 席少静 滕艳萍 王小婕 范倩
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 线粒体融合蛋白2 pEGFP-N1 重组真核表达质粒 血管平滑肌细胞
• 年，卷（期）: 2011,（19）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2210-2214
• 页数: 5页
• 分类号: R543.12|R34
• 字数: 4081字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建与增强型绿色荧光蛋白(GFP)融合的重组真核表达载体,并转染大鼠血管平滑肌细胞(A7r5),观察其在A7r5中的表达.方法 采用Trizol法快速提取A7r5的总RNA,经RT-PCR获得线粒体融合蛋白2(mfn2)的cDNA,扩增、纯化、回收mfn2基因片段.用HindⅢ和BamH Ⅰ双酶切扩增的大鼠mfn2基因片段和质粒pEGFP-N1,然后将这2种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌DH5α.将提取的重组质粒进行酶切鉴定和测序.测序正确的重组质粒用脂质体法转染A7r5,24h后观察GFP表达情况,并用RT-PCR、Western blot方法检测mfia2的表达.结果 扩增出了1条约2.2 kb的片段,酶切结果显示重组质粒被切成4.7kb大小的pEGFP-N1载体和2.2kb大小的目的片段.经测序目的片段的序列与GeneBank中大鼠mfn2基因的开放阅读编码框序列完全一致.细胞转染48h后GFP表达量最多,RT-PCR、Western blot方法检测到mfn2在A7r5中高表达.结论 成功构建了含GFP基因重组真核表达载体,并且可以在A7r5中高表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何军	宁夏医科大学附属医院心脏中心	14	15	2.0	3.0
2	滕艳萍	宁夏医科大学附属医院心脏中心	3	5	1.0	2.0
3	范倩	宁夏医科大学附属医院心脏中心	6	8	2.0	2.0
4	王小婕	宁夏医科大学附属医院心脏中心	4	4	1.0	2.0
5	席少静	宁夏回族自治区人民医院心血管科	6	5	1.0	2.0