Smad3基因siRNA表达载体的构建及沉默效应

• 作者: 吴志宏 徐顺 王爱丽 贾卿 陈波 顾耀辉 黄静
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 小分子RNA RNA干扰 Smad3 表达载体 构建 基因沉默
• 年，卷（期）: 2011,（28）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 5285-5289
• 分类号: R318
• 字数: 4458字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.28.039

摘要

背景:研究提示抑制Smad3可望抑制纤维增生和胶原的大量产生.目的:构建针对Smad3基因的siRNA表达载体,观察RNA干扰对增生性瘢痕成纤维细胞Smad3基因表达的抑制作用.方法:根据siRNA设计原则,设计3条针对Smad3基因的siRNA靶序列,分别合成两条互补的寡核苷酸链,退火后与载体pRNAT-U6连接,然后进行酶切鉴定和DNA序列测定.用脂质体包裹转染增生性瘢痕成纤维细胞,荧光定量PCR和Western blot方法检测Smad3基因的表达情况.结果与结论:测序分析结果显示:克隆入pRNAT-U6载体的针对Smad3基因的siRNA的双链寡核苷酸片段插入正确;荧光定量PCR和Western blot检测显示:转染的增生性瘢痕成纤维细胞Smad3基因的表达水平明显降低,尤以AGA CAG ACT GTG ACC AGT A(1156)为靶序列的siRNA沉默作用最强,抑制效率于转染后48 h可达45%.证实实验构建的沉默增生性瘢痕成纤维细胞Smad3基因表达的siRNA载体获得成功.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴志宏	上海市第七人民医院烧伤整形科	20	48	4.0	6.0
2	王爱丽	上海市第七人民医院烧伤整形科	8	35	3.0	5.0
3	徐顺	上海市第七人民医院烧伤整形科	9	35	3.0	5.0
4	顾耀辉	上海市第七人民医院烧伤整形科	8	31	3.0	5.0
5	黄静	上海市第七人民医院烧伤整形科	9	35	3.0	5.0
6	陈波	上海市第七人民医院烧伤整形科	7	25	3.0	4.0
7	贾卿	上海市第七人民医院烧伤整形科	7	25	3.0	4.0