沉默Toll样受体4基因表达的RNAi慢病毒载体的构建

• 作者: 刘爱华 姜勇 李煜生 王旭 阮静
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: Toll样受体4 RNA干扰 慢病毒 炎症 组织构建
• 年，卷（期）: 2011,（20）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 3693-3696
• 分类号: R318
• 字数: 4259字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.20.020

摘要

背景:Toll样受体4 (toll-like receptor4,TLR4)是介导内毒素/脂多糖应答的主要受体,在由内毒素诱导的炎性反应的信号通路中发挥着重要作用.目的:构建人TLR4基因的RNA干扰慢病毒载体,并观察其对人脐静脉内皮细胞TLR4在蛋白水平的沉默效应.方法:利用Invitrogen在线软件设计人TLR4基因shRNA序列,合成、退火形成双链寡核苷酸后克隆到线性载体pENTRTM/H1/TO的黏性末端,并进行DNA测序.得到的阳性重组子再与慢病毒载体进行重组反应,从而获得干扰TLR4基因真核表达的慢病毒载体.在脂质体的介导下将慢病毒包装辅助复合体和TLR4基因的真核表达慢病毒载体导入293FT细胞包装病毒,测定病毒滴度,感染人脐静脉内皮细胞,检验其干扰TLR4基因表达的有效性.结果与结论:实验成功构建TLR4基因真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒滴度为8.7×106 U/mL.免疫印迹杂交结果表明,所获得的慢病毒感染人脐静脉内皮细胞TLR4基因在蛋白水平的表达显著降低.实验成功构建了人TLR4基因慢病毒RNA干扰表达载体,并验证了其在人脐静脉内皮细胞上的有效性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李煜生	南方医科大学病理生理学教研室	11	27	3.0	4.0
2	刘爱华	南方医科大学附属南方医院呼吸科	31	165	8.0	11.0
3	姜勇	南方医科大学病理生理学教研室	72	377	8.0	17.0
4	王旭	南方医科大学病理生理学教研室	5	20	3.0	4.0
5	阮静	南方医科大学病理生理学教研室	1	3	1.0	1.0