重组骨形成蛋白4/7融合基因腺相关病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 刘伟 吴滨奇 毕郑钢 袁绍辉 韩晰光
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 重组人骨形成蛋白 融合基因 腺相关病毒 骨髓间充质干细胞 骨组织工程
• 年，卷（期）: 2011,（50）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 9419-9424
• 分类号: R318
• 字数: 5158字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.50.027

摘要

背景:有研究表明骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)异源二聚体比同源二聚体的活性高20倍,但相关BMP 4/7融合基因的相关病毒载体的构建至今少有报道.目的:构建重组人BMP-4/7 融合基因腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)载体并检测其表达.方法:扩增BMP-4、7成熟肽基因;分别构建质粒pGEM-BMP-4和pGEM-BMP-7;采用DNA连接法获取BMP-4/7融合基因,克隆获得pGEM-BMP-4/7质粒,进行基因测序.AAV颗粒转染HEK293细胞,收获病毒载体AAV-BMP-4/7.用SDS-PAGE电泳检测BMP-4/7融合基因蛋白在大肠杆菌的表达.用不同感染复数的AAV-BMP-4/7转染骨髓间充质干细胞3 d,提取细胞总RNA和总蛋白,进行RT-PCR和ELISA法检测融合基因BMP-4/7在骨髓间充质干细胞中的表达.结果与结论:PCR 电泳,酶切鉴定及测序结果表明,装入pSNAV质粒中的BMP-4/7 基因正确,pSNAV-BMP-4/7重组成功.RT-PCR检测到骨髓间充质干细胞BMP-4/7融合基因的转录条带,ELISA检测显示经AAV转染的骨髓间充质干细胞中BMP-4/7蛋白随着感染复数的增加表达逐渐增高(P < 0.01).结果证实,实验成功构建重组骨形成蛋白4/7融合基因腺相关病毒载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘伟	哈尔滨医科大学附属第一医院骨一科	99	441	11.0	16.0
2	毕郑钢	哈尔滨医科大学附属第一医院骨一科	82	320	9.0	13.0
3	袁绍辉	哈尔滨医科大学附属第一医院骨一科	26	138	8.0	10.0
4	吴滨奇	哈尔滨医科大学附属第一医院骨一科	10	85	6.0	9.0
5	韩晰光	哈尔滨医科大学附属第一医院骨一科	3	8	1.0	2.0