人S100A9重组腺病毒载体的构建和鉴定

• 作者: 周兰 孙双双 徐兰兰 游莉 罗进勇 邹正渝 郭元元 黎玉叶
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 钙粒蛋白B 腺病毒科 载体构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2011,（22）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2231-2233
• 分类号: R346
• 字数: 3091字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2011.22.018

摘要

目的 制备人S100A9(hS100A9)重组腺病毒载体,为进一步研究人S100A9蛋白的分子生物学作用奠定基础.方法 从pHAHA-hS100A9中PCR扩增hS100A9片段,亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-TOX,获得重组穿梭质粒pAdTrack-TOX-hS100A9.酶切、聚合酶链反应(PCR)及测序鉴定正确后经PmeⅠ酶切电转入AdEasier感受态细胞,获得重组腺病毒质粒pAdhS100A9,该质粒经PacⅠ酶切后由脂质体转染至HEK293细胞中包装扩增重组腺病毒并进行滴度测定,最后通过PCR及蛋白印迹法(Western blot)鉴定重组腺病毒.结果 正确扩增出hS100A9基因;重组穿梭质粒pAdTrack-TOX-hS100A9均及重组腺病毒质粒pAdhS100A9构建成功,并在HEK293细胞中成功包装且扩增后滴度为1 010 IU/mL;重组腺病毒AdhS100A9在HEK293细胞中成功转录和表达.结论 用pAdEasy系统成功构建hS100A9重组腺病毒载体,为探讨其生物学作用奠定了基础.