人胚胎干细胞Pten基因表达及PI3K/Akt/mTOR信号通路下游蛋白的磷酸化

• 作者: 周睿卿 杨曦 邢宏运 龚玉萍
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 人胚胎干细胞 PI3K/Akt/mTOR信号通路 Pten基因 下游蛋白 磷酸化
• 年，卷（期）: 2011,（49）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 9207-9210
• 分类号: R394.2
• 字数: 3425字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.49.020

摘要

背景:各种磷酸化蛋白质表达水平对人胚胎干细胞维持未分化状态或定向分化的影响逐渐成为人胚胎干细胞的研究热点,研究发现磷酸化蛋白质表达水平可能决定着人胚胎干细胞的命运.目的:对PI3K/Akt途径下游的关键蛋白磷酸化水平进行检测,寻找PI3K/Akt途径中能够维持人胚胎干细胞未分化状态的下游蛋白.方法:用胎鼠成纤维细胞作为饲养层,二维培养的方法培养人胚胎干细胞,胶原酶消化后待测;以饲养层细胞、K562细胞株为对照.观察人胚胎干细胞生长状态;RT-PCR检测Pten基因表达;Western Blot检测p-PTEN、p-mTOR、p-P70S6K、p-4E-BP1 4种蛋白的表达.结果与结论:人胚胎干细胞在未分化状态时Pten mRNA表达高于肿瘤细胞K562,而且Pten抑制的mTOR信号通路中关键蛋白表达均明显低于K562,尤其以p-4E-BP1表达最低.提示PI3K/Akt/mTOR信号通路下游磷酸化蛋白在人胚胎干细胞活性较低,如果抑制负调节蛋白PTEN或直接激活该通路正调节关键蛋白,可能会加快人胚胎干细胞增殖、减少凋亡,进而为定向分化、再生医学提供更多的细胞来源.