肝癌相关抗原Kinectin蛋白致敏树突状细胞诱导的CTL对肝癌细胞株杀伤作用的检测

• 作者: 晁耐霞 李日伦 罗国容 肖飞 莫发荣 谢小薰 赵飞兰 黄天明
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Kinectin-MBP 树突状细胞(DCs) 肝细胞癌 CTL
• 年，卷（期）: 2011,（26）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 3203-3207,3212
• 页数: 6页
• 分类号: R735.7
• 字数: 4095字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨肝癌相关抗原Kinectin基因重组蛋白Kinectin-MBP(MBP,麦芽糖结合蛋白)致敏树突状细胞(DCs)体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)对肝癌细胞株的杀伤作用.方法 体外基因工程的方法表达、纯化Kinectin-MBP.从正常人外周血中分离单个核细胞(PBMC),重组人粒细胞-巨噬细胞集落因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhIL-4)联合培养,诱导扩增DCs,并通过形态学、流式细胞术鉴定DCs.DCs经Kinectin-MBP致敏后,ELISA检测细胞上清液中IL-12和IFN-γ的含量；将致敏DCs与自体T淋巴细胞混合培养后,MTT法检测T细胞增殖的能力；同时诱导T细胞增殖转化为CTL,以此CTL为效应细胞,Kinectin表达阳性的肝癌细胞株bel-7404为靶细胞,LDH 4 h释放法检测CTL对肝癌细胞株的杀伤作用.结果 体外重组蛋白技术成功表达、纯化出Kinectin-MBP.PBMC经rhGM-CSF和rhIL-4联合诱导,可成功培养出DCs.DCs经Kinectin-MBP致敏后上清液中IL-12和IFN-γ的分泌量明显增高,且刺激自体T细胞增殖的能力也显著增强；同时Kinectin-MBP致敏的DCs能明显诱导CTL的增殖,此CTL对Kinectin阳性的7404肝癌细胞株有较明显的杀伤作用,其杀伤率在效靶比为25∶1时达最高峰[为(65.00±1.47 )％],显著高于其他对照组(均P ＜0.001).结论 体外诱导扩增的DCs经肝癌相关抗原Kinectin-MBP致敏后具有较强的刺激自体T细胞增殖的能力,且在体外可诱导同种CTL产生和增殖,后者对Kinectin阳性的7404肝癌细胞株具有较强的杀伤效应.该实验为将Kinectin蛋白运用于以DCs为基础的肝癌临床免疫治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵飞兰	广西医科大学组胚教研室	7	37	3.0	6.0
2	罗国容	广西医科大学组胚教研室	78	267	9.0	12.0
3	谢小薰	广西医科大学组胚教研室	71	221	8.0	11.0
4	莫发荣	广西医科大学组胚教研室	42	107	6.0	8.0
5	晁耐霞	广西医科大学组胚教研室	19	31	3.0	4.0
6	黄天明	广西医科大学组胚教研室	28	19	2.0	2.0
7	肖飞	广西医科大学组胚教研室	9	22	3.0	4.0
8	李日伦	广西医科大学组胚教研室	3	3	1.0	1.0