重组人ICOS胞外区原核表达载体的构建及表达

• 作者: 何志娟 刘宣宣 周凤云 徐翀 李文秀 毛伟平 潘杨滨
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: ICOS Jurkat细胞 pET-28a质粒 重叠延伸PCR 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 45-47
• 分类号: Q785
• 字数: 3637字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-1302.2011.02.013

摘要

构建重组人ICOS胞外区原核表达载体,并进行初步表达.根据GenBank基因库中ICOS胞外区基因序列设计引物,用RT-PCR法从人T淋巴瘤细胞Jurkat的总mRNA中扩增出ICOS胞外区基因并运用重叠延伸PCR技术扩增出ICOS胞外区同源二聚体,并将ICOS胞外区同源二聚体插入到原核表达载体PET-28a中,并对重组质粒进行鉴定.转化E.coli BL21,IPTG诱导表达目的蛋白.结果获得ICOS胞外区同源二聚体基因大小为757bp,构建的重组表达载体中目的基因序列完全正确.IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明目的蛋白在E.coli BL21(DE3)中高效表达,相对分子质量约为31ku.这说明成功地构建人重组ICOS胞外区同源二聚体的原核表达载体,并实现在大肠杆菌中大量表达.为下一步蛋白纯化及制备抗ICOS单克隆抗体奠定了基础.