肥胖MC4R重组腺病毒表达载体的构建及鉴定

• 作者: 吕金钢 巴彩凤 王光川 王玉彬 苏荣健
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 生物学
• 关键词: 肥胖 黑素皮质素受体-4 同源重组 腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2011,（15）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 45-47
• 分类号: Q784
• 字数: 2618字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2011.15.022

摘要

目的 构建黑素皮质素受体-4(MC4R)重组腺病毒表达载体,为肥胖症的基因治疗研究奠定基础.方法 PCR扩增犬MC4R目的 基因后与T载体连接,双酶切鉴定正确的T-A载体获得具有黏性末端的MCAR目的 基因;将其亚克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,构建穿梭载体pShuttle-CMV/MC4R;Pme Ⅰ单酶切pshuttle-CMV/犬MC4R后,转化到含pAdeasy-1的BJ5183感受态细胞,采用细菌内同源重组法构建腺病毒载体pAdeasy-1/pshuttle-CMV/MC4R;筛选阳性克隆子;Pac Ⅰ酶切鉴定.结果 线性化的pShuttle-CMV/MC4R转化含pAdeasy-1的BJ5183感受态细胞,16 h后获得阳性克隆子,经Pac Ⅰ酶切鉴定出一大于20 kb的大片段和3.0 kb的特征性片段,通过Bgl Ⅱ、Xho Ⅰ双酶切切下约1 000 bp的片段,含MC4R目的 基因的重组腺病毒载体构建成功.结论 细菌内同源重组法可高效、快捷的制备含犬MC4R的重组腺病毒载体;该载体为人类肥胖症的基因治疗研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	巴彩凤	辽宁医学院实验动物中心	91	369	10.0	14.0
2	苏荣健	辽宁医学院省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室	34	159	8.0	11.0
3	王光川	辽宁医学院实验动物中心	11	30	3.0	5.0
4	王玉彬		28	84	6.0	8.0
5	吕金钢	辽宁医学院实验动物中心	4	6	2.0	2.0