碱性成纤维细胞生长因子-慢病毒真核表达载体的构建及转染

• 作者: 何惠宇 盛磊 胡杨 阿尔孜古丽 阿布力孜·阿布杜拉 马莹
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 碱性成纤维细胞生长因子 骨髓间充质干细胞 基因 慢病毒 转染
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 页码范围: 1009-1014
• 分类号: R394.2
• 字数: 6196字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.06.014

摘要

背景:以往研究多采用质粒载体,由于其转染效率不高,且转染时需借助脂质体转染剂进行转染,转染具有细胞毒性,操作复杂等难以应用于临床.目的:构建携带人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)基因的慢病毒载体,转染成骨方向诱导的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),鉴定bFGF基因表达.方法:实验组:设计人bFGF基因引物,用Trizol法提取胎盘组织RNA,用RT-PCR的方法扩增出bFGF基因,连接至pLenti6/V5-D-TOPO(r) 表达质粒,经Xho-Ⅰ、BamH-Ⅰ双酶切和DNA测序证实质粒正确构建.在脂质体转染剂Lipofectamine 2000的介导下,将bFGF-pLenti6/V5-D-TOPO表达质粒同包装质粒pLP1、pLP2、包膜质粒pLP/VSVG 共转染293FT细胞株,收集bFGF-慢病毒上清转染诱导后第2代的兔BMSCs.对照组:设计GFP基因引物,以GFP- PMSLV-Plazmid为模板,PCR的方法扩增出GFP基因,连接至pLenti6/V5-D-TOPO(r) 表达质粒,构建GFP-慢病毒载体,并转染BMSCs.RT-PCR和Wetern-blot方法检测bFGF、GFP基因的表达.结果与结论:转染48 h后,对照组BMSCs可见绿色荧光蛋白表达;实验组BMSCs在转染15 d后,RT-PCR方法扩增出bFGF基因,Western-blot检测出目的蛋白表达.提示成功构建携带人bFGF和GFP基因的真核表达载体,建立转染兔BMSCs的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何惠宇		129	511	13.0	16.0
2	阿布力孜·阿布杜拉	新疆医科大学地方病重点分子生物学实验室	60	299	9.0	12.0
3	盛磊	新疆医科大学地方病重点分子生物学实验室	24	119	7.0	9.0
4	胡杨		42	199	9.0	12.0
5	马莹		3	21	3.0	3.0