麻栎ISSR - PCR扩增条件的优化

• 作者: 彭礼琼 李钧敏 王强 祁彩虹 金则新
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 麻栎 ISSR 优化 遗传多样性
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 30-32
• 分类号: S792.181
• 字数: 4310字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-1302.2011.04.010

摘要

采用改进的SDS法提取麻栎基因组DNA,利用单因素试验对ISSR反应体系中的Mg2+浓度、dNTP浓度、模板DNA用量、Taq DNA聚合酶用量、BSA浓度、引物用量进行筛选和优化,得出了适用于麻栎ISSR分析的扩增条件:10 μL PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(200 mmol/L Tris·HCl,pH值8.8,100 mmol/L KC1,1％ TritonX - 100,100 mmol/L( NH4 )2SO4,15 mmol/L MgCl2),0.75 U Taq DNA聚合酶,10 ng模板DNA,10 pmol引物,0.4mmol/LdNTP,3.5 mmol/L Mg2+.利用优化反应体系从100个ISSR引物中筛选出12个重复性好、稳定性高的引物对21个麻栎个体的DNA进行扩增,共得到85个位点,其中61个为多态位点,多态位点百分率为71.76％,Nei指数为0.322 2,Shannon信息指数为0.459 3,表明麻栎的遗传多样性处于较高水平.