腈水解酶2基因沉默细胞模型的制备

• 作者: 吕杨 苏华宾 谢院生 陈香美
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 系膜细胞 腈水解酶2基因 转染
• 年，卷（期）: 2011,（15）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 16-18
• 分类号: R394.8|Q343
• 字数: 2032字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2011.15.008

摘要

目的 为腈水解酶2(NIT2)基因研究奠定基础.方法 采用siRNA质粒转染技术制备NIT2基因沉默细胞模型,用筛网方法从大鼠肾脏中提取出肾小球用于培养原代系膜细胞,将NIT2靶序列构建pGU6/CFP/Neo质粒中(siNIT2质粒),采用JETPRIME脂质体转染法将质粒转染入原代系膜细胞中,48 h后荧光显微镜观察转染效率,利用SYBR GREEN 1定量PCR法检测NIT2基因表达,琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物.结果 荧光显微镜下转染阳性率可达50%,定量PCR结果示siNIT2质粒转染后NIT2 mRNA显著降低,琼脂糖电泳结果示PCR产物无明显杂带.结论 siRNA质粒转染法可抑制原代系膜细胞NIT2基因的表达;为NIT2基因功能研究奠定了基础.