尼罗罗非鱼绿色荧光蛋白/GH融合表达载体的构建及其在NIH293T细胞中的表达

• 作者: 张平 李大宇 杨弘 王茂元 邹芝英
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 尼罗罗非鱼 生长激素基因 荧光蛋白 转染
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 水产—研究报告
• 页码范围: 385-389
• 分类号: Q786
• 字数: 3496字
• 语种: 中文

摘要

从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)脑垂体中分离其总RNA,经反转录合成为第一条cDNA 链,再以第一条cDNA为模板,经过RT-PCR,克隆得到全长785 bp的生长激素基因,序列分析表明:GH 开放阅读框为615 bp,共编码204个氨基酸;其中含有17个氨基酸的信号肽和187个氨基酸的成熟GH 序列.同时将其插入到载体启动子下游,与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因融合,重组质粒经菌液PCR、限制性内切酶酶切和测序进行鉴定.通过脂质体转染分别将pEGFP-GH重组表达载体、pEGFP-N1转到293T细胞中,以检测尼罗罗非鱼GH基因表达的活性.结果显示,阳性对照组pEGFP-N1,有荧光表达的细胞占90%以上;pEGFP-GH可见绿色荧光,但是有荧光表达的细胞较少,强度较弱.上述试验现象表明,所获得的尼罗罗非鱼GH基因能够在真核细胞中表达,因此具有较好的表达活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨弘	中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水鱼类遗传育种和养殖生物学重点开放实验室	51	872	14.0	28.0
2	李大宇	中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水鱼类遗传育种和养殖生物学重点开放实验室	10	141	5.0	10.0
3	王茂元		24	117	6.0	10.0
4	邹芝英	中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水鱼类遗传育种和养殖生物学重点开放实验室	8	82	3.0	8.0