葡萄糖调节蛋白78真核表达载体及稳定转染人视网膜色素上皮细胞株的构建

• 作者: 吴雅臻 孙蕾 戚卉 李漫丽
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 葡萄糖调节蛋白78 真核表达载体 稳定转染 绿色荧光蛋白 视网膜色素上皮细胞
• 年，卷（期）: 2011,（46）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 8671-8675
• 分类号: R318
• 字数: 5170字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.46.029

摘要

背景:葡萄糖调节蛋白78 是存在于内质网上最多的分子伴侣蛋白,具有保护细胞对抗细胞调亡的作用.目的:构建携带并正确表达外源性人葡萄糖调节蛋白78 基因的重组真核表达载体,建立葡萄糖调节蛋白78 基因稳定转染的人视网膜色素上皮细胞系.方法:扩增人葡萄糖调节蛋白78 全长编码序列,将该目的基因与真核表达载体PEGFP-N1 进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞,以PCR 方法鉴定阳性克隆,并进行测序和分析比对,获得融合蛋白表达质粒载体pEGFP-grp78.通过阳离子脂质体介导将重组质粒pEGFP-grp78 转染入体外培养的人视网膜色素上皮细胞,经G418 筛选,建立稳定表达细胞系.结果与结论:体外培养的人视网膜色素上皮细胞株作为真核细胞表达系统,经荧光显微镜和RT-PCR 方法检测,G418 筛选的稳定转染细胞系中GFP大量表达,葡萄糖调节蛋白78 mRNA 的表达量是正常视网膜色素上皮细胞的4 倍左右,表示脂质体介导的pEGFP-grp78 质粒成功转染视网膜色素上皮细胞,并高效稳定表达葡萄糖调节蛋白78.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴雅臻	吉林大学第二医院眼科	73	208	7.0	9.0
2	戚卉	吉林大学第二医院眼科	12	43	5.0	6.0
3	孙蕾	哈尔滨医科大学第四附属医院眼科	17	39	4.0	5.0
4	李漫丽		3	11	2.0	3.0