反转录病毒介导靶向瞬时感受器电位M7基因siRNA抑制RBL-2H3细胞的活化

• 作者: 吕志强 吴毅梅 张蔚 江山平 黄林洁
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 反转录病毒 RNA干扰 RBL-2H3细胞 瞬时感受器电位M7通道 心脏 组织工程
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 页码范围: 1199-1204
• 分类号: R318
• 字数: 5230字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.07.013

摘要

背景:钙离子在肥大细胞活化后的脱颗粒反应起重要作用.瞬时感受器电位M7(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)是肥大细胞重要的候选通道.目的:构建携带大鼠靶向TRPM7-siRNA的反转录病毒载体并检测其对大鼠RBL-2H3细胞抗原活化的影响.方法:实验设计3个TRPM7-siRNA序列和1个无关对照序列,克隆到酶切的pSuper-retro-neo-GFP反转录病毒载体,用重组质粒pSuper-retro-neo-GFP-shTRPM7-(1,2,3) 采用脂质体Lipofectamine 2000转染RBL-2H3细胞,采用Western blot检测干扰效率.筛选出最有效的pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7与包装质粒共转染293FT细胞生成反转录病毒并感染RBL-2H3细胞,荧光实时定量PCR及Western blot检测TRPM7-siRNA的沉默效果.检测β-氨基已糖苷酶活性探讨RBL-2H3细胞抗原活化程度的改变.结果与结论:转染后的各组细胞中siTRPM7-3转染组的沉默效率最高(P < 0.05).pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7-3干扰组的TRPM7基因的mRNA水平和蛋白水平显著下调,致敏后其β-氨基已糖苷酶活性明显降低(P < 0.05).结果提示,降低TRPM7基因的表达可抑制RBL-2H3细胞的抗原活化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	江山平	中山大学附属第二医院呼吸内科	66	288	9.0	13.0
2	黄林洁	中山大学附属第二医院呼吸内科	12	20	3.0	3.0
3	张蔚	中山大学附属第二医院呼吸内科	42	188	7.0	11.0
4	吴毅梅	中山大学附属第二医院呼吸内科	14	83	5.0	8.0
5	吕志强	中山大学附属第二医院呼吸内科	58	321	10.0	15.0