稳定表达人热休克蛋白22内皮细胞株的构建和鉴定

• 作者: 王玲 程晓曙 陈琦 鲍慧慧
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 热休克蛋白22 人脐静脉内皮细胞 稳定表达 转染 质粒
• 年，卷（期）: 2011,（50）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 9433-9436
• 分类号: R318
• 字数: 3618字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.50.030

摘要

背景:热休克蛋白22的应激表达可能对缺氧复氧内皮具有一定的保护作用.目的:建立稳定表达人热休克蛋白22基因的内皮细胞株.方法:EcoRⅠ/kpnⅠ双酶切鉴定真核表达重组质粒pEGFP-N1-HSP22.脂质体法以重组质粒pEGFP-N1-HSP22转染人脐静脉内皮细胞,G418筛选,获得G418抗性单克隆细胞.用荧光显微镜、RT-PCR及Western-blot检测热休克蛋白22在人脐静脉内皮细胞中的表达.结果与结论:经双酶切电泳检测重组质粒pEGFP-N1-HSP22符合预期大小片段.稳定转染的单克隆人脐静脉内皮细胞中,荧光显微镜观察到每个细胞均有绿色荧光蛋白表达,RT-PCR和Western-blot检测到热休克蛋白22mRNA和蛋白表达.说明成功获得稳定表达人热休克蛋白22基因的内皮细胞株.