成人外周血平滑肌祖细胞的体外培养

• 作者: 倪旭东 周学凯 张荣庆 李飞 郭文怡
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 平滑肌祖细胞 CD14 CD105 细胞培养 诱导分化 组织工程 种子细胞
• 年，卷（期）: 2011,（14）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 2587-2591
• 分类号: R394.2
• 字数: 5020字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.14.025

摘要

背景:外周血平滑肌祖细胞具有向平滑肌细胞分化的能力.目的:探索体外分离培养成人外周血平滑肌祖细胞的方法及其生长分化特性.方法:采用密度梯度离心法分离获得成人外周血单个核细胞,培养12 d后,应用流式细胞仪鉴定分析平滑肌祖细胞并分选纯化,继续培养诱导分化.采用倒置显微镜观察平滑肌祖细胞的形态变化,免疫荧光染色法观察其α-肌动蛋白的表达,同时应用Western blot法检测调宁蛋白、平滑肌肌球蛋白重链的表达情况.此外,观察平滑肌祖细胞的生长特性,绘制生长曲线.结果与结论:成人外周血单个核细胞诱导培养4 d时开始出现细胞集落,12 d时细胞呈明显梭形.流式细胞仪分析显示,CD14和CD105双阳性的平滑肌祖细胞占贴壁细胞的(71.8±7.2)%.分选纯化的平滑肌祖细胞培养到28 d呈旋涡状生长.间接免疫荧光染色显示,α-肌动蛋白表达呈阳性.Western blot检测显示,调宁蛋白和平滑肌肌球蛋白重链分别于14,21 d开始表达,并逐渐增加.生长曲线表明,细胞生长至第6天进入对数生长期,第12天后进入平台期.提示通过对外周血单个核细胞的诱导培养,可以获得大量的平滑肌祖细胞.它能稳定增殖,并可进一步分化为平滑肌细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张荣庆	解放军第四军医大学西京医院心血管内科	18	109	7.0	10.0
2	李飞	解放军第四军医大学西京医院心血管内科	41	93	6.0	8.0
3	郭文怡	解放军第四军医大学西京医院心血管内科	13	75	5.0	8.0
4	倪旭东	解放军第四军医大学西京医院心血管内科	9	5	2.0	2.0
5	周学凯	解放军第四军医大学西京医院心血管内科	1	1	1.0	1.0