分化型胚胎软骨发育基因1特异性小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定

• 作者: 汪运山 郏雁飞 郑燕 马晓丽 魏炎
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 分化型胚胎软骨基因1 小干扰 RNA 构建 质粒 基因表达
• 年，卷（期）: 2011,（24）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 4489-4492
• 分类号: R318
• 字数: 3480字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.24.029

摘要

背景:分化型胚胎软骨基因1 可调控肿瘤生长、凋亡、衰老相关因子,与肿瘤的发生发展有着重要的联系.目的:构建针对人分化型胚胎软骨基因1 的小干扰RNA 表达载体.方法:从NCBI 中查找人分化型胚胎软骨基因1 基因全长mRNA 序列,利用Katahdin 提供的在线小干扰 RNA 模板序列设计软件,设计针对分化型胚胎软骨基因1 的2 条shRNA 的 DNA 模板单链,合成靶向分化型胚胎软骨基因1 基因转录可形成茎环结构的寡聚核苷酸,退火后与酶切后的pGreenPuro.shRNA Cloning and Expression Lentivector 质粒连接,在JM-109 菌株中扩增,并进行质粒DNA 琼脂糖凝胶电泳分析、紫外分光光度计检测、菌落PCR 以及测序鉴定.结果与结论:将含有分化型胚胎软骨基因1 目标序列25 bp 的双链 DNA 插入片段,连接到pGreenPuro.shRNA Cloning and Expression Lentivector 质粒形成重组质粒.质粒DNA 琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分析结果确认所提质粒纯度较高,可用于后续实验.菌落PCR 结果表明产物大小约为170 bp,与预期相符.测序结果表明pGreenPuro.shRNA Cloning and Expression Lentivector 质粒已经插入人分化型胚胎软骨基因1 的干扰合成片段,无碱基突变.成功构建了靶向分化型胚胎软骨基因1-小干扰 RNA 表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪运山	山东省医学科学院基础医学研究所	77	362	9.0	14.0
3	魏炎	山东省医学科学院基础医学研究所	1	1	1.0	1.0
4	郏雁飞		19	56	5.0	5.0
5	郑燕		24	78	5.0	6.0
6	马晓丽		18	65	5.0	7.0