REST/NRSF基因shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 庞希宁 施萍 李宏图
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒载体 REST/NRSF shRNA 基因 骨髓间充质干细胞
• 年，卷（期）: 2011,（32）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 6036-6040
• 分类号: R394.2
• 字数: 5134字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.32.033

摘要

背景:神经元限制性沉默因子(REST/NRSF)能负向调控神经元及胰岛细胞分化相关基因的表达.目的:构建并筛选能高效沉默大鼠REST/NRSF基因的shRNA慢病毒载体.方法:针对REST/NRSF基因设计4组特异性siRNA靶点,合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经Hpa Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后的pFU-GW-RNAi载体连接产生L-shREST/NRSF慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.包装产生慢病毒颗粒,随后将其感染大鼠骨髓间充质干细胞,采用 Real-time PCR方法检测靶基因在 mRNA 水平的沉默效率.结果与结论:PCR和测序证实,构建出了REST/NRSF shRNA的慢病毒载体L-shREST/NRSF,并能稳定转染大鼠间充质干细胞,感染效率达100%.4组shRNA序列均有基因沉默效果,并以第3组shRN序列效果最为明显.结果表明,该慢病毒表达载体能够在细胞水平有效沉默靶基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李宏图	中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室	8	7	2.0	2.0
3	施萍	中国医科大学附属第一医院全科医学教研室	140	265	8.0	14.0
4	庞希宁	中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室	35	117	6.0	9.0