重组pcDNA3.1-hBMP-2转染兔脂肪干细胞体外诱导的成骨分化

• 作者: 刘凡凡 安荣泽 杨晋 王兆杰 胡小军 袁小洪 赵俊延 赵豪 陈军平 齐新文
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形态发生蛋白2 脂肪源性干细胞 脂质体 转染 骨组织工程
• 年，卷（期）: 2011,（41）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 7601-7606
• 分类号: R318
• 字数: 6712字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.41.001

摘要

背景:骨形态发生蛋白2 具有很强的诱导干细胞成骨活性.目的:构建人骨形态发生蛋白2 基因真核表达载体,探讨其转染脂肪干细胞后的成骨效果. 方法:通过噬菌斑原位杂交筛选人混合细胞cDNA 文库获得人骨形态发生蛋白2基因,与真核表达载体pcDNA3.1-连接,构建重组质粒pcDNA3.1-hBMP-2.利用脂质体LipofectamineTM2000分别介导人骨形态发生蛋白2基因、EGFP基因转染第4 代脂肪干细胞,并经G418 进行筛选.结果与结论:酶切鉴定及DNA 测序结果证实重组质粒pcDNA3.1-hBMP-2 构建成功.经计算脂质体介导的脂肪干细胞瞬时转染率为(18.0±0.42)%,并经过G418 筛选后获得了稳定转染的细胞.细胞生长曲线表明转染后对脂肪干细胞生长、增殖无明显影响.ELISA 检测发现人骨形态发生蛋白2 组的人骨形态发生蛋白2 因子表达量均高于EGFP组及未转染组,且能够稳定表达.经人骨形态发生蛋白2 基因转染的脂肪干细胞的Ⅰ型胶原含量、碱性磷酸酶活性以及钙结节数目均比EGFP组及未转染组有明显升高.