单纯疱疹病毒Ⅰ型基因治疗载体的快速构建

• 作者: 张钦宪 蔡晓辉
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1) 载体 基因治疗 GDNF Cre 重组酶 构建
• 年，卷（期）: 2011,（41）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 7701-7705
• 分类号: R318
• 字数: 5700字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.41.025

摘要

背景:单纯疱疹病毒Ⅰ型载体因具有独特的优点目前被广泛应用,但其构建尚缺乏一种快速有效的方法.目的:利用Cre/Loxp 高效重组系统构建单纯疱疹病毒Ⅰ型载体.方法:分离单纯疱疹病毒HSV-1,将含Cre 重组酶的c66-SV40-cre 质粒转染Vero 细胞,构建一株带有Loxp 位点的重组HSV-1 框架载体HSVLoxp.构建穿梭载体pShuttle- SV40-Cre-Loxp-IRES 及重组单纯疱疹病毒Ⅰ型载体HSV-GDNF,用HAT 培养基筛选出阳性毒株后用GDNF 引物做PCR 鉴定,扩增培养后测定滴度.结果与结论:成功构建pHV-TK-GFP 质粒,并在Vero细胞内发生重组,分离出缺失了Us3基因的重组病毒HSVtk-Loxp-GFP01.成功构建HSV-1 框架载体HSVLoxp 及穿梭载体pShuttle-SV40-Cre-Loxp-IRES,成功获得GDNF 基因,并将其转移到了HSV-1 基因组上,成功构建了表达GDNF 的单纯疱疹病毒HSV-1 载体,测定其滴度约为2.25×106 IU/mL.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张钦宪	郑州大学基础医学院	126	523	10.0	15.0
2	蔡晓辉	郑州大学基础医学院	6	8	2.0	2.0