牛胎儿成纤维细胞的分离培养及转染线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因

• 作者: 于永生 张立春 朴庆林 罗晓彤
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 牛胎儿成纤维细胞 线虫ω-3脂肪酸去饱和酶 基因转染 脂质体
• 年，卷（期）: 2011,（23）
• 所属期刊栏目: 畜牧——研究报告
• 页码范围: 12-16
• 分类号: Q813.1|Q78
• 字数: 3934字
• 语种: 中文

摘要

为利用核移植法获取转基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛胎儿成纤维细胞并进行了携带线虫ω-3脂肪酸去饱和酶cDNA的表达载体转染.首先 采用组织块贴壁法分离培养牛胎儿成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导转染牛胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆,PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,对阳性克隆进行传代2～3次后利用RT-PCR检测外源基因的转录.结果表明,组织块贴壁后7天可获取原代成纤维细胞,基因转染后利用G418筛选9天即可获得转基因细胞,对转基因细胞进行传代,PCR检测显示CMV启动子和ω-3脂肪酸去饱和酶cDNA整合到细胞基因组中,RT-PCR检测显示ω-3脂肪酸去饱和酶mRNA在转基因传代细胞中得到有效转录,为下一步通过核移植方法获得转基因肉牛提供了基础.