Nesprin基因RNAi慢病毒载体的构建

• 作者: 朱洪生 杨文钢 汪永义 薛松 连锋 黄日太
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒载体 Nesprin蛋白 骨髓间充质干细胞 病毒滴度 干扰载体
• 年，卷（期）: 2011,（40）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 7541-7544
• 分类号: R394.2
• 字数: 4245字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.40.030

摘要

背景:Nesprin蛋白缺失将影响细胞骨架组织和动态平衡,引起细胞骨架刚性丧失或导致细胞过早成熟老化,其对间充质干细胞的作用如何?目的:构建Nesprin蛋白siRNA慢病毒载体,并转染骨髓间充质干细胞.方法:针对Nesprin靶基因序列设计并合成4对miRNA oligo,将4种miRNA干扰质粒转入大鼠血管平滑肌细胞,筛选最有效干扰序列;将最佳干扰序列和pDONR221载体进行重组反应,获得含干扰序列的入门载体,再将入门载体和慢病毒表达目的载体pLenti6/V5-DEST进行重组反应,获得含干扰序列的慢病毒表达载体,转染包装细胞293T细胞,包装慢病毒,以293T细胞GFP蛋白水平测定病毒滴度.慢病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞.结果与结论:测序证实合成的4对miRNA oligo正确,RT-PCR和western-blot筛选出最佳干扰miRNA质粒为SR-3,成功构建了Nesprin siRNA的慢病毒载体LV-siNesprin.包装慢病毒,浓缩病毒悬液的活性滴度为106 TU/mL.慢病毒成功了转染骨髓间充质干细胞细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	连锋	上海交通大学医学院附属仁济医院心胸外科	49	97	6.0	7.0
2	朱洪生	上海交通大学医学院附属仁济医院心胸外科	15	50	4.0	6.0
3	薛松	上海交通大学医学院附属仁济医院心胸外科	121	385	9.0	14.0
4	黄日太	上海交通大学医学院附属仁济医院心胸外科	36	96	6.0	8.0
5	汪永义	上海交通大学医学院附属仁济医院心胸外科	16	31	4.0	5.0
6	杨文钢	上海交通大学医学院附属仁济医院心胸外科	15	23	3.0	4.0