真核表达载体pIRES2-EGFP-PDLIM2的构建及在EJ细胞中的表达

• 作者: 吴荣佩 林焕懿 肖峻 邓楠 陈俊星 陈凌武 雒向宁 黄斌
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 载体 PDLIM2 真核表达 基因克隆 EJ细胞
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 页码范围: 1205-1209
• 分类号: R318
• 字数: 4916字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.07.014

摘要

背景:核因子κB在肿瘤生成过程中起重要作用,PDLIM2基因可以介导终止核因子κB的活性,解除核因子κB对肿瘤细胞的凋亡抑制作用.目的:克隆人PDLIM2全长基因,构建pIRES2-EGFP-PDLIM2真核表达载体.方法:采用反转录-聚合酶链反应从新鲜膀胱组织总RNA中克隆PDLIM2全长基因,与经Bam HI、Xho Ⅰ相同双酶切的pIRES2-EGFP质粒载体连接,构建重组质粒pIRES2-EGFP-PDLIM2,经酶切及测序鉴定重组质粒中PDLIM2基因的完整性和忠实性.荧光显微镜下观察重组质粒转染的EJ细胞GFP报告基因表达强度,并对转染细胞PDLIM2的表达进行RT-PCR检测.结果与结论:经酶切和测序证实重组质粒构建正确,并在转染的EJ细胞中获得PDLIM2的高效表达.表明用反转录-聚合酶链反应方法成功从膀胱组织中克隆出PDLIM2全长基因,成功构建pIRES2-EGFP-PDLIM2真核表达载体.