新型慢病毒载体的构建及其在人骨髓间充质干细胞基因转导中的应用

• 作者: 卢晓芳 张秀明 李伟强 李磊 杜晶春 杨霞 赖文玉 项鹏
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 多位点Gateway技术 慢病毒 人骨髓间充质干细胞 PEDF EGFP
• 年，卷（期）: 2011,（23）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 4307-4311
• 分类号: R394.2
• 字数: 4970字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.23.029

摘要

背景:构建一个组成性表达某特定基因同时携带荧光报告基因和抗生素筛选基因的慢病毒载体目前未见报道.目的:观察新型慢病毒载体pLVpuro/EF1α-PEDF-IRES-EGFP在人骨髓间充质干细胞基因转导中的表达.方法:通过PCR在PEDF基因的两端加上attB位点,构建表达载体pLVpuro/EF1α-PEDF-IRES-EGFP,将表达载体与包装质粒(ViraPowerTM Lentiviral Packaging Mix)共转染293FT细胞.通过多次感染的方法将慢病毒载体导入人骨髓间充质干细胞,转导后第7天开始使用1~5 mg/L嘌呤霉素筛选5 d,得到表达PEDF和EGFP的人骨髓间充质干细胞,并进行Western、Elisa的鉴定分析.结果与结论:经PCR和测序证实,慢病毒表达载体pLVpuro/EF1α-PEDF-IRES-EGFP构建成功;将其成功导入人骨髓间充质干细胞,经过筛选获得纯化的过表达PEDF基因的绿色荧光细胞群.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张秀明	中山大学干细胞与组织工程中心	84	697	14.0	23.0
2	杨霞	中山大学中山医学院生物化学教研室	21	123	5.0	10.0
3	李磊	中山大学中山医学院生物化学教研室	117	1028	16.0	29.0
4	赖文玉	中山大学附属第二医院儿科	15	116	6.0	10.0
5	卢晓芳	中山大学干细胞与组织工程中心	8	20	3.0	3.0
6	杜晶春	中山大学干细胞与组织工程中心	1	2	1.0	1.0
7	李伟强	中山大学干细胞与组织工程中心	9	11	2.0	2.0