齿兰环斑病毒CP基因的原核表达及其产物抗血清制备

• 作者: 吴祖建 罗金水 谢联辉
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 齿兰环斑病毒 外壳蛋白 原核表达 抗血清
• 年，卷（期）: 2011,（19）
• 所属期刊栏目: 园艺-研究报告
• 页码范围: 115-120
• 分类号: S436.8
• 字数: 3467字
• 语种: 中文

摘要

本研究在于探讨侵染兰花的重要病毒之一齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)CP基因的原核表达及其产物抗血清制备技术.从福建省漳州市采集感染齿兰环斑病毒的建兰病样,设计一对特异性引物扩增并克隆得到该病毒的外壳蛋白基因,该基因开放阅读框长477 bp,编码158aa约合18.0 kDa的蛋白质,随后将目的基因插入pET-29a(+)中构建相应的原核表达载体进行诱导表达,目的蛋白经纯化后免疫家兔获得了特异性抗血清.Western blot检测结果表明,抗血清与诱导表达的ORSV外壳蛋白发生特异性反应.间接酶联免疫吸附检测结果表明,抗血清可检测阳性病汁液的最低稀释度达1∶25600 (v/v),最佳工作浓度为1∶12800(v/v),阳性病汁液灵敏度为0.195 mg/mL(w/v),而与TMV等11种同源或异源病毒均无明显的血清学交叉反应.