小鼠survivin基因慢病毒表达载体的构建及鉴定

• 作者: 何卫阳 余昆 周青松 杨平 苟欣
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 病毒 pLV.Des3d.P/hygro Survivin 小鼠
• 年，卷（期）: 2011,（49）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 9244-9248
• 分类号: R394.2
• 字数: 4009字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.49.029

摘要

背景:间充质干细胞体内有限的存活能力严重制约其用于体内治疗方面的应用,因此寻找一种能延长存活能力的实验方法是间充质干细胞进行体内实验的重要前提.目的:应用pLV.Des3d.P/hygro构建小鼠survivin基因的慢病毒表达载体.方法:采用Oligo核酸软件对Genbank上所发表的小鼠survivin mRNA序列进行分析,设计一对survivin基因上下游引物,利用Gateway 克隆方法,分别在其两端添加attB重组位点,运用PCR扩增mSurvivin和IRES/EmGFP,将PCR产物进行BP反应然后转化到Stbl3感受态菌,通过卡那霉素抗性筛选、PCR鉴定,选取鉴定正确的pDown-mSurvivin和pTail-IRES/EmGFP克隆测序.将pDown-mSurvivin和pTail-IRES/EmGFP与pLV.Des3d.P/hygro混合进行LR反应,构建慢病毒载体pLV.EX3d.P/hygro-EF1A>mSurvivin>IRES/EmGFP,再次进行PCR、测序的鉴定.结果与结论:显示基因序列克隆正确,成功构建了含有小鼠survivin基因的重组慢病毒表达载体.说明慢病毒表达载体pLV.EX3d.P/hygro-EF1A>mSurvivin>IRES/EmGFP构建成功,为下一步研究survivin在间充质干细胞中抗凋亡作用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苟欣	重庆医科大学附属第一医院泌尿外科	194	861	13.0	19.0
2	何卫阳	重庆医科大学附属第一医院泌尿外科	81	413	10.0	16.0
3	周青松	重庆医科大学附属第一医院泌尿外科	9	28	3.0	4.0
4	杨平	重庆医科大学附属第一医院泌尿外科	5	3	1.0	1.0
5	余昆	重庆医科大学附属第一医院泌尿外科	5	8	2.0	2.0