大鼠原代肝细胞分离培养的实验研究

• 作者: 侯莉莉 刘佳
• 来源期刊: 现代医药卫生
• 学科: 医学
• 关键词: 大鼠 原代肝细胞 分离 培养
• 年，卷（期）: 2011,（22）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 3361-3363
• 分类号: R332
• 字数: 3194字
• 语种: 中文

摘要

目的:探讨胶原酶经肝门静脉灌流分离肝细胞及培养的可行性.方法:取10只SD大鼠,按照改良Seglen原位两步胶原酶灌流法分离培养原代肝细胞.以SD大鼠作为肝细胞供体,采用Ⅳ型胶原酶经门静脉灌注,下腔静脉封闭保留胶原酶消化分离肝细胞,经200目筛过滤,滤液以200 r/min离心3～5 min,重复3次,纯化肝细胞.台盼蓝拒染实验检测分离细胞活性.将10只SD大鼠分离得到的肝细胞混合,稀释50倍后接种于包被有鼠尾胶原的培养皿或培养板中,倒置显微镜下观察分离肝细胞的形态特征,糖原染色法(PAS法)鉴定分离肝细胞,MTT法测定肝细胞在培养不同时期的增殖情况.结果:平均每只大鼠肝脏分离获得(1.8±0.14) ×108/mL肝细胞,细胞活率＞85％.肝细胞内因有大量的糖原颗粒,经PAS染色后被染成红色.MTT实验结果表明在培养的第八天肝细胞增殖达到峰值,培养的第九天细胞活力开始下降.结论:采用胶原酶经肝门静脉灌流分离肝细胞是一种简单、高效的获得肝细胞的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	侯莉莉		15	164	8.0	12.0
2	刘佳		4	21	3.0	4.0